Fig.1：來源于Arhgap26的新型環狀RNA分子circArhgap26在I/R模型小鼠的心臟梗死邊緣區及血清中均顯著下調；同時，在經歷缺氧/復氧(H/R)或氧化應激處理的心肌細胞以及PCI患者的血漿中同樣呈低表達。進一步驗證表明，CircArhgap26由Arhgap26初級轉錄本經反向剪接形成，具有circRNAs典型的RNase R耐受性，并主要定位于心肌細胞的細胞質中。上述結果提示，circArhgap26可能深度參與I/R損傷的病理進程，并具備作為相關疾病診斷標志物的潛力。

Fig.2：體內功能實驗顯示，特異性過表達circArhgap26可顯著改善I/R模型小鼠的心功能，表現為射血分數(EF)與短軸縮短率(FS)的提升，同時，血清LDH水平顯著降低，心肌組織Caspase-3活性受到抑制，梗死面積縮小，心肌細胞凋亡率下降。進一步探究發現，circArhgap26能顯著下調促凋亡蛋白Bax并上調抗凋亡蛋白Bcl-2的表達。上述結果證實，circArhgap26通過拮抗心肌細胞凋亡，能有效減輕I/R損傷，發揮心肌保護作用。

Fig.3：該研究通過circRNA下拉結合質譜分析，鑒定出PKP1是circArhgap26的關鍵互作蛋白；隨后通過RNA免疫沉淀(RIP)、pull-down實驗、分子對接及共定位分析，證實了二者的直接結合。值得注意的是，H?O?刺激及I/R損傷均顯著下調了心肌細胞及心臟組織中PKP1蛋白的表達水平。RIP實驗進一步證實了circArhgap26與PKP1的相互作用嚴格依賴于PKP1的特定結構域。上述發現揭示了circArhgap26通過靶向PKP1調控心肌缺血損傷的新機制。

Fig.4：為明確PKP1在體內的功能，研究構建了AAV9介導的PKP1敲低小鼠模型。結果顯示，抑制PKP1能顯著改善I/R損傷小鼠的心功能，表現為心功能指標EF與FS的顯著提升；同時伴隨血清LDH水平及心肌組織Caspase-3活性的降低，梗死面積縮小，心肌細胞凋亡率下降。在分子水平上，抑制PKP1能夠下調Bax表達、同時上調Bcl-2的表達，逆轉了Bax/Bcl-2失衡。上述表型與circArhgap26過表達的效果高度一致，表明抑制PKP1可通過調控凋亡通路減輕心肌I/R損傷，從而發揮確切的心肌保護作用。

Fig.5:為確定二者的遺傳上下游關系，研究開展了circArhgap26與PKP1的共過表達挽救實驗。結果顯示，過表達PKP1可顯著逆轉circArhgap26上調對I/R誘導心肌損傷的保護效應，表現為EF、FS下降，血清LDH、心肌Caspase-3活性升高，梗死面積擴大，心肌細胞凋亡加劇，同時Bax表達上調、Bcl2表達下調。這些發現表明circArhgap26的心肌保護作用依賴于對PKP1的抑制，二者在心肌I/R損傷調控中存在直接的功能拮抗關系。

Fig.6：研究證實，circArhgap26可通過抑制PKP1的棕櫚酰化修飾，降低其蛋白穩定性進而促進降解。機制研究表明，過表達circArhgap26不僅顯著下調心肌細胞中PKP1的表達水平，還在CHX處理下加速了PKP1的降解過程。值得注意的是，棕櫚酰化抑制劑2-BP能模擬circArhgap26的效應，顯著降低PKP1的棕櫚酰化水平與蛋白穩定性。反之，過表達circArhgap26也可直接抑制PKP1的棕櫚酰化修飾。上述數據表明circArhgap26對PKP1的調控依賴于對其棕櫚酰化修飾的抑制作用，這一機制是circArhgap26發揮心肌保護功能的關鍵分子基礎。

Fig.7：研究進一步闡明了circArhgap26調控PKP1的分子機制：circArhgap26通過競爭性結合PKP1的ARM1結構域，有效阻斷棕櫚酰轉移酶ZDHHC1與PKP1的相互作用，從而抑制ZDHHC1介導的PKP1棕櫚酰化修飾。敲低ZDHHC1或突變PKP1的棕櫚酰化位點(C14S/C136S)均能顯著降低PKP1的棕櫚酰化水平并促進其降解。其表型與circArhgap26過表達高度吻合：不僅能抑制PKP1與ZDHHC1的結合，還阻斷了后續的棕櫚酰化修飾，最終降低PKP1的蛋白穩定性。這一競爭性結合機制是circArhgap26抑制PKP1、發揮心肌保護作用的核心分子基礎。

Fig.8：該研究進一步揭示了PKP1的下游效應機制：PKP1能夠特異性結合APAF1 mRNA的5'UTR區域，通過增強其翻譯效率（而非影響mRNA穩定性），顯著上調APAF1的蛋白表達。敲低PKP1可顯著減少多聚核糖體結合的APAF1 mRNA，降低APAF1的翻譯水平，并抑制下游caspase-9與caspase-3的活化，有效阻斷了線粒體凋亡通路的激活。上述數據表明，PKP1通過正向調控APAF1的翻譯過程激活線粒體凋亡通路，而circArhgap26通過抑制PKP1的蛋白穩定性，成功阻斷這一促凋亡信號軸，最終實現對心肌I/R損傷的保護作用。